نکاتی که هنگام کار با دستگاه HPLC مد نظر قرار گیرد:
1ـ کلیّه حلّالهای مورد استفاده در دستگاه HPLC ، باید از کیفیت عالی برخوردار بوده و از نوع HPLC grade باشند.
2ـ تمامی نمونه ها و محلولهای بافر تهیّه شده، قبل از استفاده در دستگاه HPLC ، باید با فیلترهای 0.45 mm صاف شوند.
3ـ استفاده از حلّالهای ناخالص و دارای کیفیت پایین، باعث جذب آنها در ستون، تغییر ویژگی و در نهایت گرفتگی ستون میگردد.
4ـ شرایط صحیح نگهداری ستونهای HPLC به شرح زیر است:
الف ـ برای نگهداری کوتاه مدت (یک شب)، ستون باید در همان حلّال مورد استفاده (بدون بافر) نگهداری شود. هرگز ستون را در محلول بافر نگهداری نکنید.
ب ـ برای نگهداری میان مدت (دو روز تا یک هفته)، باید ستون را با آب مقطّر بشویید تا جلوی رشد قارچها گرفته شود.
ج ـ برای نگهداری طولانی مدت، ستون باید در حلّال فاقد پروتئین نگهداری شود و میزان آب موجود در محلول از 50% بیشتر نباشد. بهترین حلّال در این مورد استونیتریل است.
د ـ نمکهای مورد استفاده در تهیة بافر، در استونیتریل نامحلول هستند و ممکن است باعث گرفتگی لوله ها و ستون شوند. به این دلیل قبل از تعویض فازهای متحرّک آبی (Aqueous mobile phase ) با حلّالهای آلی (Organic solvents )، از شست وشوی کامل بافر از ستون HPLC ، اطمینان حاصل کنید.
5 ـ زمان تعادل ستون، به ابعاد آن بستگی دارد. عموماً ستونها بعد از عبور حلّال به میزان 20 برابر حجم ستون، به تعادل می رسند. در مورد ستونی به ابعاد 250´4.6 mm که حجم آن 2.91 ml می باشد، زمان مورد نیاز برای تعادل با جریان حلّال 1 ml/min ، 58 min خواهد بود. با افزایش جریان حلّال، می توان زمان تعادل ستون را کاهش داد.
6 ـ از اِعمال تغییرات سریع دما یا فشار بر روی ستون، اجتناب کنید.